Анализ действия Т-лимфоцитов периферической крови больного на клетки почечно-клеточного рака в модельных системах

Введение. Внедрение современных методов иммунной терапии на основе препаратов, блокирующих иммунные контрольные точки, значительно повысило эффективность лечения. В то же время не у всех больных наблюдается ответ на такое лечение и надежные предиктивные маркеры отсутствуют. Создание модельной системы для оценки Т-клеточного иммунного ответа на опухоль представляется актуальной задачей.

Цель исследования – создание модельной системы для оценки Т-клеточного иммунного ответа на клетки рака почки больного.

Материалы и методы. Первичную культуру из опухолевой ткани светлоклеточного рака почки получали в стандартных стерильных условиях клеточного бокса. Фракцию Т-клеток периферической крови выделяли из мононуклеарных клеток. Активацию Т-клеток проводили с помощью антител к CD3 и CD28. Оценку изменения показателя «клеточный индекс» выполняли с применением биосенсорной технологии RTCA хCELLigence (ACEA Biosciences, США).

Результаты. Полученные клетки опухоли и фракцию Т-клеток от того же больного культивировали совместно в течение 24 ч, анализируя изменения численности клеточной популяции с интервалом 30 мин. Показано, что неактивированные Т-клетки не влияют на пролиферативные свойства культивируемых раковых клеток, в то время как активированные Т-клетки подавляли пролиферативные свойства раковых клеток, что связано с увеличением доли Т-клеток, несущих рецептор HLA-DR (CD3+HLA–DR+) вследствие активации. Оцениваемая опухольспецифичная активность Т-клеток может отсутствовать, проявляться частичным подавлением пролиферативных свойств или приводить к полной гибели опухолевых клеток. В последнем случае отсутствие таких клеток подтверждали методом проточной цитометрии.

Заключение. Разработанная система позволяет оценить эффективность действия иммунных Т-клеток для конкретного больного, в том числе в присутствии ингибиторов иммунных контрольных точек, что может быть использовано в качестве прогностической оценки при выборе средств лечения.

1. Злокачественные новообразования в России в 2020 году (заболеваемость и смертность). Под ред. А.Д. Каприна, В.В. Старинского, А.О. Шахзадовой. М.: МНИОИ им. П.А. Герцена – филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России, 2021. 252 с.

2. Мерабишвили В.М., Полторацкий А.Н., Носов А.К. и др. Состояние онкологической помощи в России. Рак почки (заболеваемость, смертность, достоверность учета, одногодичная и погодичная летальность, гистологическая структура). Часть 1. Онкоурология 2021;17(2):182–94. DOI: 10.17650/1726-97762021-17-2-182-194

3. Носов Д.А., Алексеев Б.Я., Гладков О.А. и др. Практические рекомендации по лекарственному лечению почечноклеточного рака. Злокачественные опухоли: Практические рекомендации RUSSCO 2021;11(3s2):31. DOI: 10.18027/2224-5057-2021-11-3s2-31

4. Alva A., Daniels G.A., Wong M.K. et. al. Contemporary experience with high-dose interleukin-2 therapy and impact on survival in patients with metastatic melanoma and metastatic renal cell carcinoma. Cancer Immunol Immunother 2016;65(12):1533–44. DOI: 10.1007/s00262-016-1910-x

5. Rini B.I., Plimack E.R., Stus V. et al. Pembrolizumab plus axitinib versus sunitinib for advanced renal-cell carcinoma. N Engl J Med 2019;380(12):1116–27. DOI: 10.1056/NEJMoa1816714

6. Chevrier S., Levine J.H., Zanotelli V.R.T. et al. An immune atlas of clear cell renal cell carcinoma. Cell 2017;169(4):736–49.e18. DOI: 10.1016/j.cell.2017.04.016

7. Xu Y., Miller C.P., Warren E.H., Tykodi S.S. Current status of antigen-specific T-cell immunotherapy for advanced renal-cell carcinoma. Hum Vaccin Immunother 2021;17(7):1882–96. DOI: 10.1080/21645515.2020.1870846

8. Raimondi A., Sepe P., Zattarin E. et al. Predictive biomarkers of response to immunotherapy in metastatic renal cell cancer. Front Oncol 2020;10:1644. DOI: 10.3389/fonc.2020.01644

9. Shen M., Chen G., Xie Q. et al. Association between PD-L1 expression and the prognosis and clinicopathologic features of renal cell carcinoma: a systematic review and meta-analysis. Urol Int 2020;104(7–8):533–41. DOI: 10.1159/000506296

10. Набережнов Д.С., Морозов А.А., Фридман М.В. и др. Система PD-1/PD-L1 при иммунотерапии рака почки. Часть 2. Маркеры и препараты иммунотерапии рака почки. Медицинский алфавит 2019;1(10):54–61. DOI: 10.33667/2078-5631-2019-1-10(385)-54-61

11. Braun D.A., Hou Y., Bakouny Z. et al. Interplay of somatic alterations and immune infiltration modulates response to PD-1 blockade in advanced clear cell renal cell carcinoma. Nat Med 2020;26(6):909–18. DOI: 10.1038/s41591-020-0839-y

12. Борунова А.А., Заботина Т.Н., Шоуа Э.К. и др. Cубпопуляционная структура лимфоцитов периферической крови доноров. Российский биотерапевтический журнал 2020;19(4):54–64. DOI: 10.17650/1726-9784-2020-19-4-54-64

13. Jang Y.Y., Cho D., Kim S.K. et al. An improved flow cytometrybased natural killer cytotoxicity assay involving calcein AM staining of effector cells. Ann Clin Lab Sci 2012;42(1):42–9.

14. Coronnello C., Busà R., Cicero L. et. al. Radioactive-free method for the thorough analysis of the kinetics of cell cytotoxicity. J Imaging 2021;7(11):222. DOI: 10.3390/jimaging7110222